HRP快速標(biāo)記試劑盒產(chǎn)品說明書

 在您使用本產(chǎn)品前請(qǐng)認(rèn)真閱讀說明書，這對(duì)您順利完成實(shí)驗(yàn)很有幫助。

產(chǎn)品貨號(hào)：6210-1MGX5

產(chǎn)品名稱：HRP快速標(biāo)記試劑盒（每次標(biāo)記量可以低到0.1mg）

原理與應(yīng)用：利用氧化法活化辣根過氧化物酶（HRP）的糖基，經(jīng)過活化的HRP帶有醛基可以與待標(biāo)記物的游離氨基結(jié)合，發(fā)生希夫堿反應(yīng)（Schiff's base reaction）。本試劑盒適用于帶有游離氨基的物質(zhì)的標(biāo)記，比如：帶有游離氨基（伯胺）的抗體、蛋白或者小分子化合物。本試劑盒采用特有穩(wěn)定技術(shù)，活化HRP保存在液體中，吸取方便，每次標(biāo)記量可以小到100UG，讓您的標(biāo)記工作更易把控和操作！

試劑盒組成：

操作步驟：

1.  首先去除待標(biāo)記抗體或蛋白中的疊氮鈉、以及含有氨基的緩沖成分物質(zhì)，比如甘氨酸、Tris 等，還有EDTA等物質(zhì)，可采用透析和超濾的辦法置換緩沖液，以去除干擾物質(zhì)達(dá)到好的標(biāo)記效果！透析或超濾緩沖液優(yōu)選0.01M CB,PH:9.6緩沖液(說明書附件有經(jīng)驗(yàn)配方無需調(diào)整PH），若實(shí)驗(yàn)室沒有碳酸鹽試劑再采用0.01M PBS（PH:7.0-7.4均可）透析或超濾置換緩沖液，然后調(diào)整抗體或蛋白的濃度到2mg/mL。如果抗體和蛋白不含上述這些干擾物質(zhì)可以直接用上述PBS或CB緩沖液調(diào)整濃度到2mg/mL備用。

2.  從4℃取出HRP標(biāo)記試劑盒，使各組分充分混勻。

3. 取500μL抗體或蛋白（約1mg），加入100μL預(yù)活化HRP(1mg)液體中，用移液槍反復(fù)吹打幾次混勻，混勻后加入HRP標(biāo)記啟動(dòng)液108μL（加入啟動(dòng)液量依據(jù)：每10μL蛋白和HRP混合液加1.8μL啟動(dòng)液）繼續(xù)混勻數(shù)次，避免產(chǎn)生氣泡。然后避光30℃-37℃溫箱偶聯(lián)反應(yīng)2-3小時(shí)，若遇快要下班也可放4℃反應(yīng)24小時(shí)左右（此法效果一樣或者更好不必?fù)?dān)心）。

4. 偶聯(lián)結(jié)束將反應(yīng)終止液粉管中加入1mL去離子水混勻，取50μL加入3所述反應(yīng)液中（加入終止液量依據(jù)：每1mg HRP加入終止液50μL），充分混勻，室溫放置1 小時(shí)或者4℃ 2小時(shí)。

5. 終止完成后，可直接加入等體積的標(biāo)記物保存液，充分混勻，置于-20℃保存。如果想更長(zhǎng)期的保存建議先用0.067M PBS  PH:7.0（說明書附件有經(jīng)驗(yàn)配方）透析或超濾置換緩沖液后再加標(biāo)記物保存液。這樣可以保存3年左右甚至更長(zhǎng)。

儲(chǔ)存方法：建議避光存放在4℃（或2～8℃）。

注意事項(xiàng)：

1. 待標(biāo)記物緩沖液成分過于復(fù)雜以及含有氨基小分子和NAN3的初始緩沖液必須透析或超濾置換掉，請(qǐng)采用0.01M PBS（PH:7.0-7.4均可）或0.01M CB,PH:9.6緩沖液均可。

2. 如果待標(biāo)記物不是抗體是其它蛋白，那么請(qǐng)根據(jù)分子量參考蛋白和酶用量：若分子量在40KD以上建議1mg蛋白使用1mg HRP；如果分子量在30KD左右，建議1mg蛋白使用1.3mg HRP；如果分子量在20KD左右，建議1mg蛋白使用2mg HRP；如果分子量在10KD左右，建議1mg蛋白使用4mg HRP；此時(shí)啟動(dòng)液和終止液請(qǐng)按步驟3和4描述標(biāo)準(zhǔn)適量加入；如果標(biāo)記量為小于1mg的抗體或蛋白（每次標(biāo)記量可以小到100UG，但不低于100UG），HRP和其它試劑加入量按比例折算即可。

3. 小分子藥物不建議直接標(biāo)記HRP，因?yàn)镠RP的結(jié)構(gòu)不能結(jié)合足夠的藥物會(huì)造成效價(jià)偏低，這種情況建議先偶聯(lián)BSA增加小分子偶聯(lián)量再進(jìn)行HRP標(biāo)記，這樣效果會(huì)非常好。

4. 如果待標(biāo)記物含有其它蛋白，需要把無關(guān)蛋白同樣計(jì)算進(jìn)去，盡管如此也請(qǐng)您慎重選擇這樣的樣品進(jìn)行標(biāo)記。

5. 本試劑盒保存4℃可以保證1年內(nèi)開啟有效，活化HRP開啟后小心取用切勿污染堿性物質(zhì)。

6. 終止液干粉一共5支，原則上每一支配好后僅限一次性使用，因此您可以根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)總量合理配制使用。

附件：

1. 0.01M  CB ，PH:9.6緩沖液配制：取NaHCO3, 0.67g和Na2CO3, 0.21g加水到1L溶解完全即可，不用調(diào)節(jié)PH。

2. 0.067M PBS,  PH:7.0緩沖液配制：取NaH2PO4.2H2O，5.35g和Na2HPO4.12H2O, 11.7g以及NaCL，9g加水1L溶解完全，然后添加NaOH，0.35g再次混勻后即可，不用再調(diào)節(jié)PH。

特別提示：如果您在實(shí)驗(yàn)過程中遇到任何困難，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系我們技術(shù)團(tuán)隊(duì)獲取支持。

HRP快速標(biāo)記試劑盒產(chǎn)品說明書

 在您使用本產(chǎn)品前請(qǐng)認(rèn)真閱讀說明書，這對(duì)您順利完成實(shí)驗(yàn)很有幫助。

產(chǎn)品貨號(hào)：6210-0.5MGX2

產(chǎn)品名稱：HRP快速標(biāo)記試劑盒（每次標(biāo)記量可以低到0.1mg）

原理與應(yīng)用：利用氧化法活化辣根過氧化物酶（HRP）的糖基，經(jīng)過活化的HRP帶有醛基可以與待標(biāo)記物的游離氨基結(jié)合，發(fā)生希夫堿反應(yīng)（Schiff's base reaction）。本試劑盒適用于帶有游離氨基的物質(zhì)的標(biāo)記，比如：帶有游離氨基（伯胺）的抗體、蛋白或者小分子化合物。本試劑盒采用特有穩(wěn)定技術(shù)，活化HRP保存在液體中，吸取方便，每次標(biāo)記量可以小到100UG，讓您的標(biāo)記工作更易把控和操作！

試劑盒組成：

操作步驟：

1. 首先去除待標(biāo)記抗體或蛋白中的疊氮鈉、以及含有氨基的緩沖成分物質(zhì)，比如甘氨酸、Tris 等，還有EDTA等物質(zhì)，可采用透析和超濾的辦法置換緩沖液，以去除干擾物質(zhì)達(dá)到好的標(biāo)記效果！透析或超濾緩沖液優(yōu)選0.01M CB,PH:9.6緩沖液(說明書附件有經(jīng)驗(yàn)配方無需調(diào)整PH），若實(shí)驗(yàn)室沒有碳酸鹽試劑再采用0.01M PBS（PH:7.0-7.4均可）透析或超濾置換緩沖液，然后調(diào)整抗體或蛋白的濃度到2mg/mL。如果抗體和蛋白不含上述這些干擾物質(zhì)可以直接用上述PBS或CB緩沖液調(diào)整濃度到2mg/mL備用。

2. 從4℃取出HRP標(biāo)記試劑盒，使各組分充分混勻。

3. 取250μL抗體或蛋白（約0.5mg），加入50μL預(yù)活化HRP(0.5mg)液體中，用移液槍反復(fù)吹打幾次混勻，混勻后加入HRP標(biāo)記啟動(dòng)液54μL（加入啟動(dòng)液量依據(jù)：每10μL蛋白和HRP混合液加1.8μL啟動(dòng)液）繼續(xù)混勻數(shù)次，避免產(chǎn)生氣泡。然后避光30℃-37℃溫箱偶聯(lián)反應(yīng)2-3小時(shí)，若遇快要下班也可放4℃反應(yīng)24小時(shí)左右（此法效果一樣或者更好不必?fù)?dān)心）。

4. 偶聯(lián)結(jié)束將反應(yīng)終止液粉管中加入1mL去離子水混勻，取25μL加入3所述反應(yīng)液中（加入終止液量依據(jù)：每1mg HRP加入終止液50μL），充分混勻，室溫放置1 小時(shí)或者4℃ 2小時(shí)。

5. 終止完成后，可直接加入等體積的標(biāo)記物保存液，充分混勻，置于-20℃保存。如果想更長(zhǎng)期的保存建議先用0.067M PBS  PH:7.0（說明書附件有經(jīng)驗(yàn)配方）透析或超濾置換緩沖液后再加標(biāo)記物保存液。這樣可以保存3年左右甚至更長(zhǎng)。

儲(chǔ)存方法：建議避光存放在4℃（或2-8℃）。

注意事項(xiàng)：

1. 待標(biāo)記物緩沖液成分過于復(fù)雜以及含有氨基小分子和NAN3的初始緩沖液必須透析或超濾置換掉，請(qǐng)采用0.01M PBS（PH:7.0-7.4均可）或0.01M CB,PH:9.6緩沖液均可。

2. 如果待標(biāo)記物不是抗體是其它蛋白，那么請(qǐng)根據(jù)分子量參考蛋白和酶用量：若分子量在40KD以上建議1mg蛋白使用1mg HRP；如果分子量在30KD左右，建議1mg蛋白使用1.3mg HRP；如果分子量在20KD左右，建議1mg蛋白使用2mg HRP；如果分子量在10KD左右，建議1mg蛋白使用4mg HRP；此時(shí)啟動(dòng)液和終止液請(qǐng)按步驟3和4描述標(biāo)準(zhǔn)適量加入；如果標(biāo)記量為小于0.5mg的抗體或蛋白（每次標(biāo)記量可以小到100UG，但不低于100UG），HRP和其它試劑加入量按比例折算即可。

3. 小分子藥物不建議直接標(biāo)記HRP，因?yàn)镠RP的結(jié)構(gòu)不能結(jié)合足夠的藥物會(huì)造成效價(jià)偏低，這種情況建議先偶聯(lián)BSA增加小分子偶聯(lián)量再進(jìn)行HRP標(biāo)記，這樣效果會(huì)非常好。

4. 如果待標(biāo)記物含有其它蛋白，需要把無關(guān)蛋白同樣計(jì)算進(jìn)去，盡管如此也請(qǐng)您慎重選擇這樣的樣品進(jìn)行標(biāo)記。

5. 本試劑盒保存4℃可以保證1年內(nèi)開啟有效，活化HRP開啟后小心取用切勿污染堿性物質(zhì)。

6. 終止液干粉一共2支，原則上每一支配好后僅限一次性使用，因此您可以根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)總量合理配制使用。

附件：

1. 0.01M  CB ，PH:9.6緩沖液配制：取NaHCO3, 0.67g和Na2CO3, 0.21g加水到1L溶解完全即可，不用調(diào)節(jié)PH。

2. 0.067M PBS,  PH:7.0緩沖液配制：取NaH2PO4·2H2O，5.35g和Na2HPO4·12H2O, 11.7g以及NaCL，9g加水1L溶解完全，然后添加NaOH，0.35g再次混勻后即可，不用再調(diào)節(jié)PH。

特別提示：如果您在實(shí)驗(yàn)過程中遇到任何困難，請(qǐng)及時(shí)聯(lián)系我們技術(shù)團(tuán)隊(duì)獲取支持。